Promotor Do Gene Pgk1 de Pichia Pastoris Para Expressao Heterologa : Expressão de alfa amilase utilizando pPGK¿3: Um promotor constitutivo de 400 pb para P.pastoris

A levedura metilotrfica Pichia pastoris tem sido utilizada com sucesso para a expresso de vrias protenas heterlogas sendo que diversos vetores j foram desenvolvidos para este sistema. Os principais vetores de expresso de P. pastoris so baseados no promotor do gene AOX1 que codifica a enzima lcool oxidase 1. Alguns estudos tm sido realizados para o uso de promotores alternativos. Em nosso laboratrio foi isolado e caracterizado o promotor do gene PGK1 de P. pastoris (PPGK1), um promotor forte e constitutivo, que representa uma alternativa promissora para a construo de novos vetores. O objetivo deste estudo foi determinar a regio promotora mnima do PPGK1 por meio de delees controladas utilizando o gene da -amilase de Bacillus subtilis como gene reprter. Quatro delees foram obtidas sendo que a menor (PPGK3), com ~400 pb, manteve atividade promotora. Foi demonstrado que esta seqncia capaz de dirigir a integrao de um vetor no genoma de P. pastoris e 51% dos clones transformantes tiveram mais de uma cpia integrada. O uso deste promotor propiciou a expresso heterloga de -amilase em altos nveis (250 U.mL-1).