Aufreinigung und Konzentrierung anaboler Steroide mittels der Immunoaffinitatschromatographie

Doktorarbeit / Dissertation aus dem Jahr 1999 im Fachbereich Chemie - Analytische Chemie, Note: 1,0, Deutsche Sporthochschule Kln (Unbekannt, Biochemie), Sprache: Deutsch, Abstract: Inhaltsangabe:Einleitung: Die in der Spurenanalytik von pharmakologisch wirksamen Substanzen eingesetzten Extraktionsverfahren reichen oft nicht aus, um die gesuchte Substanz in der biologischen Matrix (Urin, Blut, Haar, etc.) eindeutig nachzuweisen. Das liegt zum einen daran, da die Konzentrationen dieser Substanzen uerst gering sind und zum anderen, da die Bioprobe eine solch komplexe Matrix bildet, da sich Interferenzen krpereigener Stoffe bei der anschlieenden gaschromatographisch-massenspektrometrischen Detektion nicht vermeiden lassen. Durch eine besondere Aufreinigung, die Immunoaffinittschromatographie genannt wird, sollen diese Strsubstanzen entfernt werden. Dabei macht man sich das in der Natur einzigartige Prinzip zunutze, nach dem Antikrper ihr korrespondierendes Antigen (zu analysierende Substanz) mit hoher Selektivitt erkennen und reversibel binden. Die Antikrper werden auf eine Festphase immobilisiert und anschlieend mit der Probe inkubiert. Die gesuchte Substanz kann so nach dem Schlssel-Schlo-Prinzip von den Antikrpern gebunden werden, whrend unspezifische Molekle in der Bioprobe verbleiben. Nach einer Waschphase wird mittels eines organischen Solvens die Dissoziation des Antikrper-Antigen-Komplexes bewirkt und der Analyt in gereinigter Form gewonnen. Die Herstellung von Antikrpern mit der gewnschten Spezifitt (z.B. gegen anabole Steroide) wurde in dieser Arbeit durch Kopplung von Steroidhormonen an ein Protein und Immunisierung von Kaninchen mit diesen Steroid-Protein-Konjugaten ermglicht. Kleine Molekle in der Grenordnung von Steroiden lsen per se keine Immunantwort und damit keine Produktion von Antikrpern aus. Erst durch die Bindung an ein groes Carriermolekl, wie z.B. Bovine Serum Albumin (BSA) oder Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH), we