Expression Et Caract�risation de la Lipoxygenase Recombinante D Olive

Les lipoxygnases (LOXs, EC 1.13.11.12) sont des dioxygnases qui catalysent l'oxydation des acides gras polyinsaturs. Plusieurs isoformes vgtales ont t caractrises mais leur rle physiologique reste peu connu. Dans le but d'claircir le rle de la LOX chez l'olive, un ADNc codant pour une de ses isoformes a t clon. Cet ADNc montre de forts pourcentages d'identit avec d'autres LOXs vgtales. L'enzyme recombinante, prsente une double spcificit, elle produit des 9- et des 13-hydroperoxydes dans un rapport 2:1. Bien que l'activit LOX soit dtecte tous les stades de maturation du fruit, la 9/13-LOX est uniquement exprime dans les stades noirs. Sans exclure son rle dans l'laboration de l'arme, ces rsultats suggrent que la 9/13-LOX est probablement associe aux phnomnes de maturation et de snescence des fruits. Afin d'augmenter le rendement de la 9/13-LOX d'olive recombinante, l'accessibilit du substrat son site actif a t facilite par mutagense dirige. Les mutants, prsentent un taux de conversion de l'acide linolique jusqu' 4 fois suprieur celui de l'enzyme native et ont des paramtres cintiques similaires la LOX1 de soja commercialise.